抗體標(biāo)記（僅供參考）
試驗(yàn)材料：
藻紅蛋白：分子量約 240000 道爾頓；PD-10 柱(葡聚糖凝膠層析柱 Sephadex G-25M) ，安瑪西亞 Amersham公司產(chǎn)品，產(chǎn)品目錄號 No. 17-0851-01； NAP5 柱(葡聚糖凝膠層析柱 Sephadex G-25 DNA grade)， 安瑪西亞Amersham 公司產(chǎn)品，產(chǎn)品目錄號 No 17-0853-02；琥珀酰亞胺-4-(N- 甲基馬來酰亞胺)環(huán)已烷-1-碳酸酯)(SMCC)，Pierce 公司，產(chǎn)品目錄號 No.22360；N-乙基馬來酰胺（NEM），Sigma 公司，產(chǎn)品目錄號 E-1271；二甲基亞砜（DMSO），Aldrich 公司，產(chǎn)品目錄號 No. 27,685-5。
試驗(yàn)方法：
1、藻紅蛋白溶液
將藻紅蛋白沉淀復(fù)溶為溶液，用脫鹽柱或超濾管除鹽并將其緩沖液置換為20mM 磷酸鹽緩沖液，調(diào)整藻紅蛋白的最終濃度為5-10毫克/毫升。
2、藻紅蛋白的衍生化
將琥珀酰亞胺-4-(N-甲基馬來酰亞胺)環(huán)已烷-1-碳酸酯)(SMCC)溶解于無水二甲基亞砜（DMSO）配制成 10毫克/毫升的母液，每毫克的藻紅蛋白添加 11 微升的琥珀酰亞胺-4-(N-甲基馬來酰亞胺)環(huán)已烷-1-碳酸酯)
(SMCC)，鋁箔封好后于室溫旋轉(zhuǎn)反應(yīng) 60 分鐘，使藻紅蛋白分子上的氨基與琥珀酰胺反應(yīng)生成衍生化的藻紅蛋白。交換緩沖液預(yù)先平衡凝膠層析柱，將衍生化的藻紅蛋白過柱，收集藻紅蛋白峰。
3、抗體的處理
二硫蘇糖醇（DTT）溶解于蒸餾水中，配制成 1 摩爾/升的二硫蘇糖醇（DTT）母液，調(diào)整抗體的濃度，使其濃度至少為 4 毫克/毫升。
每毫升抗體溶液中加入 20 微升的二硫蘇糖醇（DTT）母液，室溫靜置反應(yīng) 40 分鐘，將抗體的二硫鍵打開形成巰基。交換緩沖液預(yù)先平衡凝膠柱，將反應(yīng)液過柱，收集抗體部分。
4、藻紅蛋白和抗體的共價(jià)交聯(lián)
每毫克抗體加入 3.2 毫克的琥珀酰亞胺-4-(N-甲基馬來酰亞胺)環(huán)已烷-1-碳酸酯)(SMCC)衍生化的藻紅蛋白，鋁箔封好后于室溫旋轉(zhuǎn)反應(yīng) 60 分鐘，使藻紅蛋白分子上的馬來酰亞胺基和抗體上的巰基實(shí)現(xiàn)共價(jià)交聯(lián)。
10 毫克的 N-乙基馬來酰胺（NEM）溶解于 1.0 毫升的無水二甲基亞砜（DMSO）中制成 N-乙基馬來酰胺（NEM）母液（現(xiàn)配現(xiàn)用）。每毫克抗體中加入 3.4 微升N-乙基馬來酰胺（NEM）母液，鋁箔封好后于室溫旋轉(zhuǎn)反應(yīng) 60 分鐘， 反應(yīng)后，使抗體上的巰基封閉。
5、交聯(lián)物的存儲(chǔ)
將交聯(lián)物于存儲(chǔ)緩沖液中透析后保存于2-8℃。
歡迎來到上海起發(fā)生物科技有限公司網(wǎng)站！
咨詢電話：13308436663
產(chǎn)品型號：78GD10007 
