使用方法

（一）支原體清除試劑 1

1. 使用之前，先將支原體清除試劑1用 PBS或者無(wú)血清培養(yǎng)液稀釋10倍后，放 4℃冰箱保存。

2. 將 50-100萬(wàn)個(gè)細(xì)胞鋪到 60mm的細(xì)胞培養(yǎng)皿內(nèi)，加入4mL含支原體清除試劑1的正常細(xì)胞培養(yǎng)液（使用稀釋 10倍后的支原體清除試劑 1，按 1:100 比例加入）。

3. 每 2-3天更換細(xì)胞培養(yǎng)液。換液時(shí)，用 PBS沖洗 2-3 遍細(xì)胞，以將死亡的支原體清洗干凈。而后加入新鮮的含支原體清除試劑1的正常細(xì)胞培養(yǎng)液。期間如果細(xì)胞密度過(guò)大，請(qǐng)保持細(xì)胞密度適當(dāng)（貼壁細(xì)胞可能需要yi酶消化），并更換新的培養(yǎng)皿。

4. 處理15天后，可以用支原體檢測(cè)試劑盒進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)支原體是否殺滅。如果仍有支原體殘留，可以考慮再處理6天。

5. 以后每隔1個(gè)月進(jìn)行支原體的常規(guī)檢測(cè)，以保證沒有新的支原體污染。

l 建議將細(xì)胞分成三份：第一份添加清除試劑1，第二份添加清除試劑2，第三份同時(shí)添加清除試劑1和清除試劑2進(jìn)行殺滅（注：同時(shí)添加兩種藥物可能對(duì)細(xì)胞的毒性較大，但是殺滅的概率會(huì)非常高）， 這樣支原體對(duì)兩種藥物同時(shí)產(chǎn)生抗性和處理過(guò)程中細(xì)胞同時(shí)死亡的概率會(huì)非常低。如果同時(shí)添加清除試劑 1 和清除試劑 2，細(xì)胞可以每 2 天更換一次培養(yǎng)液。

l 處理過(guò)程中，注意每天觀察細(xì)胞的狀況，如果發(fā)現(xiàn)支原體清除試劑對(duì)細(xì)胞的毒性較大，可以加大培養(yǎng)液中的血清濃度或者提高細(xì)胞的密度。

l 清除試劑1和清除試劑2在降低濃度后（使用稀釋10倍后的支原體清除試劑1或者 2，再按 1:500 比例加入，即藥物的最終稀釋比例為 1:5000）也可以加入到培養(yǎng)液中作為短期（1-2個(gè)月）的支原體污染預(yù)防藥物，但是不建議在細(xì)胞培養(yǎng)液中長(zhǎng)期（超過(guò)2個(gè)月）加入，因?yàn)橛锌赡軐?dǎo)致對(duì)該兩種藥物有抗性的支原體出現(xiàn)。